产品目录

本试剂盒采用高效、专一的吸附柱，特异性结合核酸分子，去除杂质，提取细菌中的基因组DNA。提取的基因组DNA纯度高，片段大，质量稳定可靠。使用本试剂盒得到的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

组分	50T	100T
Buffer GA	15mL	25mL
Buffer GB	15mL	25mL
Buffer GD	13mL	26mL
Buffer PW	15mL	25mL
Buffer EB	12mL	25mL
Proteinase K	1mL	2×1mL
纯化套件(吸附柱+收集管)	50套	100套
说明书	1份	1份

保存：室温(15～25℃)干燥，有效期12个月。

• 更长时间的保存可置于2～8℃。温度较低时，有的溶液可能产生沉淀，使用前在37℃水浴中加热，直至沉淀消失。
  
• 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
  
• 若缓冲液GA或GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。
  
• 所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心，速度为12000rpm(~13400×g)。

使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

• 取细菌培养液1～5mL，10000rpm离心1min，尽量吸净上清。
  
• 向菌体沉淀中加入200μL缓冲液GA，振荡至菌体彻底悬浮。
  注意：对于较难破壁的革兰氏阳性菌，可略过第2步骤，加入溶菌酶进行破壁处理，具体方法如下。
  加入200μL溶菌酶溶液(溶菌酶缓冲液(20mM Tris,pH8.0；2mM Na2- EDTA；1.2% Triton)中加入终浓度为20mg/ml的溶菌酶(溶菌酶必须用溶菌酶干粉溶解在缓冲液中进行配制，否则会导致溶菌酶无活性) (客户自备，货号：LA14012))，37℃处理30min以上。
  如果需要去除RNA，可加入4μL RNase A(100mg/ml)溶液(客户自备)，振荡15sec，室温放置5min。
  
• 加入20μL Proteinase K(20mg/ml)溶液，混匀。
  
• 加入220μL缓冲液GB，振荡15sec，70℃放置10min。
  注意：加入缓冲液GB时会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
  
• 加入220μL无水乙醇，充分振荡混匀15sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
  
• 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱G1中(吸附柱放入收集管中)，12000rpm离心30sec，倒掉废液，将吸附柱G1放回收集管中。
  
• 向吸附柱G1中加入500μL缓冲液GD(使用前请先检査是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心30sec，倒掉废液，将吸附柱G1放入收集管中。
  
• 向吸附柱G1中加入600μL漂洗液PW(使用前请先检査是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心30sec，倒掉废液，将吸附柱G1放入收集管中。
  
• 重复操作步骤8。
  
• 将吸附柱G1放回收集管中，12000rpm离心1min，倒掉废液。将吸附柱G1置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
  注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
  
• 将吸附柱G1转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50～200μL洗脱缓冲液EB，室温放置2～5min，12000rpm离心1min，将溶液收集到离心管中。
  注意：洗脱缓冲液体积不应少于50μL，体积过小影响回收效率。为増加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱G1中，室温放置2min，12000rpm离心1min。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0～8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

提取得率

材料	提取量	DNA得率
细菌培养液	106-108 cells	5～20μg

DNA浓度及纯度检测
1.得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。
回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2.DNA在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。
3.OD260/OD280比值应为1.7～1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。
相关搜索：细菌基因组DNA提取试剂盒，细菌gDNA提取试剂盒，Bacterial Genome DNA Extraction Kit